海藻糖試劑盒操作詳情

產(chǎn)品說(shuō)明：
海藻糖存在于大量有機(jī)體中，包括細(xì)菌、藻類、酵母、植物、昆蟲和其他無(wú)脊椎動(dòng)物。由于海
藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物學(xué)特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及
毒性物質(zhì)等惡劣環(huán)境下保護(hù)生物體細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸和蒸餾水。

操作步驟：

一、海藻糖提取：
1、 細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入
1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），室溫
靜置 45min，振蕩 3~5 次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
2、 組織的處理：稱取約 0.1g 樣本，常溫研碎，加入 1mL 提取液，室溫靜置 45min，振蕩 3~5 次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
3、 血清（漿）的處理：吸取約 100μL 血清（漿），加入 0.9mL 提取液，室溫靜置 45min，振蕩 3~5次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
4、 標(biāo)準(zhǔn)品的處理：標(biāo)準(zhǔn)品用 1mL 雙蒸水溶解，溶液濃度為 10mg/mL，稀釋到 0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0mg/mL。

二、測(cè)定操作表：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、 工作液的配制：臨用前在每瓶試劑一中加入 16mL 蒸餾水后，緩慢加入 64mL 濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用。用不完的試劑 4℃保存一周。

4、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：取 0.25mL 標(biāo)準(zhǔn)液和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取 1mL 至比色皿中，在 620nm 處測(cè)吸光值 A。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣本的濃
度（y）和吸光度（x）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、 樣本測(cè)定：取 0.25mL 樣本和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取 1mL 至比色皿中，在 620nm 處測(cè)吸光值 A。

注意：若吸光值大于 1，請(qǐng)將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

海藻糖試劑盒操作詳情