信帆生物-明膠酶譜法試劑盒檢測小技巧

    
基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

檢測原理

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液，可檢測少至0.1~0.5μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測，如果小膠加樣孔為10~15個，則總計可檢測500~750個樣品。
 

實驗中的小貼士告訴大家：

1.做酶譜要測定樣品蛋白的濃度（同Western blot，建議用BCA法）；

2.酶譜法是測定樣品中MMP-2、9活性的，如果煮沸使蛋白變性就沒有用了，故禁忌煮沸；

3.上樣緩沖液中也不能加β-巰基乙醇，這點由western blot轉(zhuǎn)作明膠酶譜的朋友切記、切記；

4.蛋白上樣量必須保證一樣，不會出現(xiàn)一致的透明條帶，如果不能保證上樣量一致，測出的相對活性也沒有統(tǒng)計分析的意義；

5.上樣時zui重要的一點，必須在4℃環(huán)境中操作，我用的是冰臺，同時所用的蛋白樣品（-80℃冰箱）不能是以前曾解凍使用過的，必須是新取出的，因為只要解凍就會有部分酶降解，影響你的結(jié)果。此外做過一次酶譜的蛋白樣品也不要反復使用，下次應使用其它已分裝、未解凍過的樣品；

6.電泳后的步驟很簡單，液體別配錯，照著方法做就可以了。

如果你曾做過Western blot，在這里恭喜你了，只要注意幾個小細節(jié)，明膠酶譜對你非常簡單。

購買我司試劑盒可以提供免費代測服務，客戶準備好樣本，上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區(qū)的客戶，樣本用泡沫箱子包好，放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)， 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。

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