可溶性淀粉合成酶的測定原理!
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中,催化淀粉鏈延長,主要負責支鏈淀粉的合成。
檢測原理:
SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP,在反應體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,NADPH生成量與前一步反應中ADP生成量呈正比,340nm下測定NADPH增加量即可計算SSS活性。
活性計算:
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/mg prot)=樣本稀釋倍數(shù)(6.5)÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)=522×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/g 鮮重)=樣本稀釋倍數(shù)(6.5)÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3)×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =522×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)
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