Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料

Hoechst 33342它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，常被稱(chēng)為DNA探針。實(shí)驗(yàn)研究中Hoechst 33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。活細(xì)胞和固定的細(xì)胞均可標(biāo)記。Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，常被稱(chēng)為DNA探針。實(shí)驗(yàn)研究中Hoechst 33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。活細(xì)胞和固定的細(xì)胞均可標(biāo)記。

產(chǎn)品參數(shù)

別名：HOE 33342；bisBenzimide；二苯甲亞胺, 三氯化氫 2-(4-乙基苯基)-5-(4-甲基-1-哌-嗪基)-2,5-二-1H-苯并咪唑

CAS：23491-52-3

分子式：C27H28N6O·3HCl

分子量：561.93 

性狀：暗黃色粉末

溶解性：溶于水（20mg/mL）

使用方法

配制儲(chǔ)存液

用無(wú)菌超純水配制成1-5 mg/ml的儲(chǔ)存液于4℃避光保存。使用時(shí)用PBS或者其他合適緩沖液將其稀釋成0.5-10μg/ml工作液。

A：固定的細(xì)胞或組織染色

對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33342染色。或者直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33342染色。

a）對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。

b）對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。

B：活細(xì)胞或組織染色

1) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色液，充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。     

2) 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

3) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

4) 封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。