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植物組織直接PCR試劑盒檢測原理

發(fā)布時間: 2022-06-21  點擊次數(shù): 809次

植物組織直接PCR試劑盒檢測原理


產(chǎn)品用途

本試劑盒采用*的裂解緩沖液裂解組織(新鮮、凍存組織),所得裂解物無需純化即可作為模板,用抗抑制的2×Super direct PCR Taq Mix進行擴增,擴增產(chǎn)物可直接點樣電泳。



產(chǎn)品特點

· 直接以裂解物為模板進行PCR,適用于樣品高通量篩選。

· 擴增片段<2 kb 。


適用范圍

非多糖、多酚植物。


操作步驟

請?zhí)崆皽?zhǔn)備95℃的水浴或金屬浴。

A:基因組DNA提取

1、取5 mg或0.5 cm2左右的植物組織樣品,剪碎后加入50µl Buffer P1,吹吸或渦旋混勻。(注意:切勿加入過量葉片組織,以便酶解反應(yīng)更順利進行)。

2、95℃水浴或金屬浴孵育10分鐘。

3、加入50µl Buffer P2,混勻后直接作為模板進行PCR或置于4℃或-20℃保存。

B:PCR擴增


注意事項

· 樣品避免反復(fù)凍融。

· 使用時試劑*化凍、混勻。

· 對于不易裂解組織(如蠟質(zhì)葉片),可以延長95℃的孵育時間至30分鐘。

· 如擴增條帶較弱,可適當(dāng)增加模板用量或PCR循環(huán)數(shù)(不宜超過40個循環(huán))。

· 如非特異擴增較多,可調(diào)整退火溫度或適當(dāng)增減模板用量。

· 提取物4℃可保存三個月,-20℃可保存六個月(避免反復(fù)凍融)。             


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