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乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒使用原理及注意事項

發(fā)布時間: 2023-08-17  點擊次數(shù): 466次

乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒使用原理及注意事項

 

產(chǎn)品名稱:乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱:LDH Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格:500T

儲存條件:-20℃

乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Release Assay Kit),是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應,通過比色法檢測細胞毒性時釋放的乳酸 脫氫酶活性或檢測其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。

本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測,更常用于以LDH釋放為指標的細胞毒性檢測。同時,基于細胞總乳酸脫氫酶活性的檢測,本試劑盒也可以用于檢測細胞增殖和細胞毒性檢測。

細胞凋亡或壞死而造成的細胞膜結構的破壞會導致細胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液里,其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測從質(zhì)膜破裂的細胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性,就可以實現(xiàn)對細胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細胞膜完整性的重要指標,并被廣泛用于細胞毒性檢測。LDH釋放被認為是以前使用放射性的51Cr標記細胞,隨后通過51Cr釋放進行 細胞膜完整性檢測的安全有效的替代方法。

本試劑盒的基本原理是,在乳酸脫氫酶的作用下,NAD+被還原生成NADH,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應生成NAD+和強生色物甲臜(formazan),在490nm波長下產(chǎn)生吸收峰,從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關

 

注意事項:

1、冷凍會使樣品中部分乳酸脫氫酶失活,4℃可放置2-3天。建議樣品準備好后盡量當天完成測定。
2、如果檢測細胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶,由于血清含有乳酸脫氫酶,建議血清的使用濃度不要超過1%,并最好使用熱滅活血清。如果一定需要使用10%血清,在檢測時一定要設置沒有細胞,但加入了相同體積培養(yǎng)液的對照孔,以用于消除背景。
3、細胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過大,都會造成細胞釋放乳酸脫氫酶增加。
4、如果希望進行乳酸脫氫酶活性的絕對定量,用戶需自備乳酸脫氫酶標準品。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7、本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其它用途。不得存放于普通住宅內(nèi)


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