AP標(biāo)記的兔抗狗IgG

堿性磷酸酶（AP）用于標(biāo)記抗體，常用戊二醛一步法，將酶和單抗混合，再加入適量戊二醛，使酶和抗體蛋白的NH2分別與兩個(gè)醛基結(jié)合，制備成結(jié)合物。該法簡(jiǎn)便，但所得產(chǎn)物不均一，抗體活性損失大，酶標(biāo)記率低。其程序如下：

1. 將5mg AP加入1ml抗體溶液（2mg/ml）中溶解，裝入透析袋，于4℃對(duì)0.01mol/L PH7.2 PBS透析18小時(shí)，換液三次。

2. 加入2.5%戊二醛20ul，室溫作用1-2小時(shí)，4℃對(duì)PBS透析過(guò)夜，其間換液三次。

3. 換用0.05mol/L PH8.0 Tris-HCl緩沖液透析，4℃過(guò)夜，換液三次。

4. 取出標(biāo)記抗體，用含1%BSA的Tris-HCl緩沖液稀釋至4ml，即為AP標(biāo)記物原液。

5. 每毫升中加入0.4ml甘油，小量分裝，保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)驗(yàn)室操作注意事項(xiàng)：

1.實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)試驗(yàn)的情況和性質(zhì)進(jìn)行必要的防護(hù)。根據(jù)試驗(yàn)可能發(fā)生的危險(xiǎn)事故佩戴必要的防護(hù)工具，例如穿好試驗(yàn)服，戴橡膠手套，防護(hù)面具，防毒面具等。實(shí)驗(yàn)前，要注意清理試驗(yàn)場(chǎng)周圍的安全隱患。檢查試驗(yàn)裝置、藥品和相關(guān)物品是否有不符合要求的情況等。

2.遵循化學(xué)藥品的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)的規(guī)律，不盲目蠻干和主觀臆測(cè)化學(xué)反應(yīng)的過(guò)程。應(yīng)根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)和過(guò)程選擇匹配的反應(yīng)裝置，不可圖省事省去必要的安全措施。

3.經(jīng)常估計(jì)到實(shí)驗(yàn)的危險(xiǎn)性

實(shí)驗(yàn)事故雖不可預(yù)測(cè)，但其危險(xiǎn)性的大小是可以估計(jì)到的。即使對(duì)不大了解的實(shí)驗(yàn)，也必須推測(cè)其危險(xiǎn)程度而制訂相應(yīng)的預(yù)防措施。象下面這類實(shí)驗(yàn)，必須十分注意。

①不了解的反應(yīng)及操作;

②存在多種危險(xiǎn)性的實(shí)驗(yàn)(如發(fā)生火災(zāi)、毒氣等);

③在嚴(yán)酷的反應(yīng)條件(如高溫、高壓等)下進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。

4.充分作好發(fā)生事故時(shí)的預(yù)防措施并加以檢查。

平時(shí)注意熟悉需要關(guān)閉的主要龍頭、電氣開(kāi)關(guān)，滅火器的位置及操作方法，避免發(fā)生事故時(shí)才四處尋找應(yīng)急的物品。

5.實(shí)驗(yàn)的后處理。實(shí)驗(yàn)的后處理工作，亦屬實(shí)驗(yàn)過(guò)程的組成部份。特別不可忽略回收溶劑和廢液、廢棄物等的處理。

AP標(biāo)記的兔抗狗IgG